健康人骨髓中的铁主要存在于幼红细胞和骨髓小粒中。骨髓中的三价铁和蛋白质结合不牢固，经稀盐酸处理而呈游离状态，并能与酸性亚铁氰化钾溶液发生普鲁士蓝反应，生成蓝色亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁部位。根据反应的强弱可了解骨髓中细胞内、外铁的含量。
铁染色的应用比较普遍，因此对于此方法的操作过程需要大家熟练掌握，此方法操作过程中所用到的试剂较多，且影响结果的因素也很多，因此在回答问题时需要我们思考全面，条理清晰。一起来回顾一下其操作过程吧!
首先我们需要准备的物品有骨髓涂片、染色缸、水浴箱、显微镜、酸性亚铁氰化钾溶液(临用前配制)，2g/L核固红-硫酸铝溶液等。
接着进行染色：干燥骨髓涂片放入酸性亚铁氰化钾溶液中，染色30分钟。用蒸馏水冲洗，待干。用核固红染液复染10～15分钟。流水冲洗，待干，镜检。
在此过程中，无论是骨髓片的质量，还是染色时间、试剂质量等很多因素，都会影响结果判断，因此在答题时需要注意将这些影响因素也补充上，这一步有锦上添花的效果，能使我们答案内容更加充实，同时也体现了我们工作的细心。
由此我们可以总结出此题的答题思路大体为三步：
第一步：操作前准备;
第二步：操作步骤;
第三步：注意事项。
那就让我们结合思路，一起回答上述问题吧!
1.操作前准备：
(1)器材：骨髓涂片、染色缸、水浴箱、显微镜等。
(2)试剂：酸性亚铁氰化钾溶液(临用前配制)，2g/L核固红-硫酸铝溶液。
2.操作步骤：
(1)干燥骨髓涂片放入酸性亚铁氰化钾溶液中，染色30分钟。
(2)用蒸馏水冲洗，待干。
(3)用核固红染液复染10～15分钟。
(4)流水冲洗，待干，镜检。
3.注意事项：
(1)玻片需经去铁处理。将新玻片用清洁液浸泡24小时，取出后反复水洗，浸入95%乙醇中24小时，晾干，再浸泡在5%盐酸中24小时，取出后用双蒸水反复清洗玻片，取出烘干后备用。
(2)骨髓取材合格。细胞外铁存在于骨髓小粒中，故选择骨髓小粒丰富的涂片进行铁染色。取材不佳时，影响实验结果。
(3)酸性亚铁氰化钾溶液须新鲜配制。加浓盐酸时要慢，尤其不要把浓盐酸直接加到全量的亚铁氰化钾溶液中，否则会出现沉淀不溶解的现象。
(4)固定时间过长会导致阳性率降低。
(5)基质液中取出的骨髓涂片，用小水流冲洗或冲洗玻片背侧面，以免冲掉骨髓小粒。
(6)染色时HCl的浓度过低，会导致阳性率降低。
(7)已做过Wright染色的陈旧骨髓涂片，可浸入甲醇中至颜色褪去，再行铁染色。
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